Бэтмен на этот раз не один! Наш герой объединяется с супергероями со всех концов Вселенной, идет на встречу новым приключениям с легким комическим контрастом. Синий жук, Зеленая стрела, Аквамен и другие герои поддерживают правосудие вместе с Бэтменом. Хотя действия разворачиваютсяв основном в Готеме, Бэтмен часто будет находиться вне города, сталкиваясь с незнакомыми раньше ситуациями. С огромным количеством противников за каждым углом, Бэтмен по прежнему будет пологаться на свою хитрость, изобретательность и технологические устройства, чтобы нести правосудие.

Супермен — это борец с нарушителями закона. Он — представитель инопланетной цивилизации. Его планета — Криптон (Krypton) — взорвалась, но ребёнка успели поместить в капсулу и отправить в космос. В итоге он оказался на Земле. Супермен одет в трико красно-синего цвета и с огромной буквой «S» на груди. Ни одно оружие ему не страшно. Убить его может только Криптонит, радиоактивное вещество с его планеты, смертельное для Супермена.

Случайный укус радиоактивного паука на научной выставке даровал нескладному школьнику Питеру Паркеру невероятные паучьи способности. Когда грабитель убил его любимого дядю Бена, Питер решает использовать свои удивительные силы, чтобы защищать людей. Он навсегда запомнил слова своего дяди: «Чем больше сила, тем больше и ответственность!». Он становится Человеком-Пауком, бесстрашным героем в маске.

Мультсериал больше ориентирован на взрослую публику, в отличии от предыдущих типичных мультфильмов про супергероев. Стремясь сделать его более «тёмным», создатели мультсериала превысили общепринятые границы мультфильмов в этом жанре: «Бэтмен: мультсериал» стал первым мультфильмом, в котором было изображено огнестрельное вместо лазерного оружия; Бэтмен на самом деле бил руками и ногами противников, также присутствовала кровь; в дополнение ко всему, многие фоны в мультсериале были нарисованы на чёрной бумаге (стиль ар-деко с очень тёмной гаммой цвета). По началу, создатели мультсериала Тимм и Радомски столкнулись с сопротивлением и недовольством со стороны руководства студии, но успех первого фильма Бёртона о Бэтмене оказал им хорошую поддержку, тогда была выпущена пилотная серия, которая, по словам Тимма «скинула много людей с наших спин».